Role of the autologous mesenchymal stem cells compared with platelet rich plasma on cicatrization of cutaneous wounds in diabetic mice / Papel das células-tronco mesenquimais autólogas em comparação com plasma rico em plaquetas na cicatrização de feridas cutâneas em camundongos diabéticos

Chronic cutaneous lesions affect 15% of diabetic human patients and represent a risk 15 to 46 times larger of limb amputations compared to people with normal glycemia. It is assumed that half of these amputations could be prevented by early treatment of wounds, for example, with proper cell therapy. Objectives: In this study, the action of the autologous transplant of mesenchymal stem-cells (MSC) was evaluated compared to the treatment with autologous platelet rich plasma (PRP) in the cicatrization of cutaneous lesions induced in diabetic mice. These animals were previously treated with streptozootocin to induce diabetes mellitus and round wounds of 1.5cm in diameter were created in the posterior region. Diameters of the wounds and healing time were evaluated during 30 days and the results were submitted to variance analysis and Tukey's test average. It was noticed that the animals treated with MSC presented a more accelerated cicatrization of the cutaneous lesion than the animals treated with PRP. However, the treatment with PRP presented better results than just the daily asepsis of the lesions with saline or covering them with semi-permeable bandage. Besides, the use of semi-permeable bandage kept the cutaneous lesions of diabetic mice did not interfere negatively with cicatrization, proved to be harmless to use, but kept the cutaneous lesions more hydrated than the ones exposed to the environment.(AU)

Lesões cutâneas crônicas afetam 15% dos pacientes diabéticos e humanos representam um risco 15 a 46 vezes maior de amputações de membros em comparação com as pessoas com a glicemia normal. Supõe-se que a metade destas amputações poderia ser evitada por meio do tratamento precoce das feridas cutâneas com, por exemplo, uma adequada terapia celular. Objetivos: Neste estudo, a ação do transplante autólogo de células estaminais mesenquimais (MSC) foi avaliada em comparação com o tratamento com plasma rico em plaquetas autólogo (PRP) na cicatrização de lesões cutâneas induzidas em camundongos diabéticos. Estes animais foram previamente tratados com estreptozotocina para induzir diabetes mellitus e feridas redondas de 1,5 cm de diâmetro foram criadas na região posterior. Os diâmetros dos ferimentos e tempo de cicatrização foram avaliados durante 30 dias e os resultados foram submetidos à análise de variância e média pelo teste de Tukey. Verificou-se que os animais tratados com MSC apresentam uma cicatrização mais acelerada da lesão cutânea que do que os animais tratados com PRP. No entanto, o tratamento com PRP apresentou melhores resultados do que apenas a assepsia das lesões diariamente com solução salina ou cobrindo-os com atadura semi-permeável. Além disso, a utilização de atadura semi-permeável mantidas as lesões cutâneas de camundongos diabéticos não interfere negativamente com a cicatrização, provou ser inofensiva para usar, mas manteve as lesões cutâneas hidratadas mais do que os expostos ao meio ambiente.(AU)

Direct intramyocardial transthoracic transplantation of bone marrow mononuclear cells for non-ischemic dilated cardiomyopathy: INTRACELL, a prospective randomized controlled trial / Ensaio clínico prospectivo randomizado sobre terapia com células mononucleares da medula óssea para cardiomiopatia dilatada idiopática: INTRACELL

Objective: We tested the hypothesis that direct intramyocardial injection of bone marrow mononuclear cells in patients with non-ischemic dilated cardiomyopathy can improve left ventricular function and physical capacity. Methods: Thirty non-ischemic dilated cardiomyopathy patients with left ventricular ejection fraction <35% were randomized at a 1:2 ratio into two groups, control and treated. The bone marrow mononuclear cells group received 1.06±108 bone marrow mononuclear cells through mini-thoracotomy. There was no intervention in the control group. Assessment was carried out through clinical evaluations as well as a 6-min walk test, nuclear magnectic resonance imaging and echocardiogram. Results: The bone marrow mononuclear cells group showed a trend toward left ventricular ejection fraction improvement, with magnectic resonance imaging - at 3 months, showing an increase from 27.80±6.86% to 30.13±9.06% (P=0.08) and returning to baseline at 9 months (28.78%, P=0.77). Magnectic resonance imaging showed no changes in left ventricular ejection fraction during follow-up of the control group (28.00±4.32%, 27.42±7.41%, and 29.57±4.50%). Echocardiogram showed left ventricular ejection fraction improved in the bone marrow mononuclear cells group at 3 months, 25.09±3.98 to 30.94±9.16 (P=0.01), and one year, 30.07±7.25% (P=0.001). The control group showed no change (26.1±4.4 vs 26.5±4.7 and 30.2±7.39%, P=0.25 and 0.10, respectively). Bone marrow mononuclear cells group showed improvement in New York Heart Association functional class, from 3.40±0.50 to 2.41±0.79 (P=0.002); patients in the control group showed no change (3.37±0.51 to 2.71±0.95; P=0.17). Six-minute walk test improved in the bone marrow mononuclear cells group (348.00±93.51m at baseline to 370.41±91.56m at 12 months, P=0.66) and there was a non-significant decline in the control group ...

Objetivo: Testamos a hipótese de que a injeção intramiocárdica direta de células mononucleares de medula óssea em pacientes portadores de cardiomiopatia dilatada não-isquêmica pode melhorar a função ventricular e a capacidade física. Métodos: Trinta pacientes com cardiomiopatia dilatada não isquêmica e fração de ejeção 35% foram randomizados na razão 1:2 em grupos controle e tratado. Grupo células mononucleares de medula óssea recebeu 1,06 ± 108 células mononucleares de medula óssea por mini-toracotomia. Grupo controle não recebeu intervenção. Avaliação foi feita clinicamente e por teste de caminhada 6 minutos (T6m), ressonância magnética e ecocardiogramas. Resultados: Grupo células mononucleares de medula óssea mostrou tendência de melhora da Fração de ejeção - ressonância magnética aos 3 meses, 27,80±6,86% para 30,13±9,06% (P=0,08), retornando ao basal aos 9 meses (28,78%, P=0,77). Grupo controle não apresentou variação (28,00±4,32%; 27,42±7,41% e 29,57±4,50%). Ecocardiogramas - fração de ejeção melhorou no grupo células mononucleares de medula óssea aos 3 meses: 25,09±3,98 para 30,94±9,16 (P=0,01) e aos 12 meses (30,07±7,25%, P=0,001), enquanto o controle não variou: 26,1±4,4 vs. 26,5±4,7 e 30,2±7,39%, P=0,25 e 0,10, respectivamente). Células mononucleares de medula óssea melhorou classe funcional New York Heart Association: 3,40±0.50 para 2,41±0,79 (P=0,002); controles não mudaram (3,37±0,51 para 2,71±0,95; P=0,17). T6m melhorou no grupo células mononucleares de medula óssea (348,00±93,51 m inicial para 370,41±91,56 m aos 12 m, P=0,66) e declinou sem significância no ...

Terapia gênica para cardiopatia isquêmica: revisão de ensaios clínicos / Gene therapy for ischemic heart disease: review of clinical trials

Cardiopatia isquêmica grave com angina refratária a formas convencionais de tratamento apresenta-se em uma crescente incidência. Para tratar angina refratária, terapias alternativas na tentativa de redução da isquemia miocárdica e alívio de sintomas têm sido estudadas. Neste contexto, a terapia gênica representa uma opção, pela possibilidade de induzir angiogênese, estabelecer circulação colateral e reperfundir miocárdio isquêmico. Diversos ensaios clínicos têm sido conduzidos e, com exceção de casos isolados e específicos de efeitos adversos, há indicação de segurança, viabilidade e potencial eficácia da terapia. O benefício clínico não está bem definido. Neste artigo, revisamos os ensaios clínicos que utilizaram terapia gênica para tratamento de pacientes cardiopatas isquêmicos. A abordagem inclui: (1) isquemia miocárdica e angiogênese, sobre os aspectos fisiopatológicos envolvidos; (2) fatores de crescimento, tratando sobre aspectos específicos e justificando a utilização em pacientes cardiopatas isquêmicos sem opções pela terapêutica convencional; (3) ensaios clínicos controlados, onde é apresentado um resumo dos principais estudos envolvendo terapia gênica para tratamento da cardiopatia isquêmica grave; (4) nossa experiência, especialmente sobre resultados preliminares do primeiro ensaio clínico de terapia gênica do Brasil e (5) perspectivas.

Severe ischemic heart disease with refractory angina, occurs in increasing incidence. Alternative forms of treatment, in an attempt to reduce myocardial ischemia and relief of symptoms has been studied. In this context, gene therapy is an option, for the possibility of inducing angiogenesis, establish collateral circulation and reperfuse ischemic myocardium. Several clinical trials have been conducted and, except for specific cases of adverse effects, there is indication of safety, feasibility and potential effectiveness of therapy. The clinical benefit, however, is not yet well established. In this article we review the clinical trials of gene therapy for patients with ischemic heart disease. The approach includes: (1) myocardial ischemia and angiogenesis on the pathophysiological aspects involved, (2) growth factors, dealing with specific aspects and justifying the use in cardiac patients with no option for conventional therapy, (3) controlled clinical trials, where a summary of the main studies involving gene therapy for severe ischemic heart disease is presented, (4) our experience, especially on preliminary results of the first gene therapy clinical trial in Brazil and (5) future prospects.

Expression of mdr isoforms in mice during estrous cycle and under hormone stimulation

The multidrug resistance (MDR) phenotype is associated with the expression of P-glycoprotein (Pgp), coded by the multigenic mdr family. Mice present the isoforms mdr1 and mdr3, which are responsible for multidrug resistance, and mdr2, that is involved in the transport of phospholipids. mdr1 expression has more recently been associated also with the secretion of steroid hormones. This work presents an RT-PCR analysis of the expression of mdr isoforms, in several organs of mice during different phases of the estrous cycle. Additionally, females were ovariectomized, submitted to different hormone treatments, and their uterus was analyzed for the expression of mdr isoforms. The results show that in the adrenal gland and ovaries mdr1 is the main isoform during proestrus, and that progesterone or a combination of progesterone and estrogen induce the expression of all mdr isoforms in the uterus of ovariectomized females. We suggest that the functions of mdr1 and mdr3 are overlapping, that mdr3 may be the more efficient isoform in the detoxification function, and that mdr1 may be more closely related to the secretion of steroid hormones.

Modelo experimental de transfecção gênica em miocárdio normal de cães: perspectivas de terapia gênica para o tratamento da cardiopatia isquêmica / Experimental model of gene transfection in healthy canine myocardium: perspectives of gene therapy for ischemic heart disease

OBJECTIVE: To assess the transfection of the gene that encodes green fluorescent protein (GFP) through direct intramyocardial injection. METHODS: The pREGFP plasmid vector was used. The EGFP gene was inserted downstream from the constitutive promoter of the Rous sarcoma virus. Five male dogs were used (mean weight 13.5 kg), in which 0.5 mL of saline solution (n=1) or 0.5 mL of plasmid solution containing 0.5 æg of pREGFP/dog (n=4) were injected into the myocardium of the left ventricular lateral wall. The dogs were euthanized 1 week later, and cardiac biopsies were obtained. RESULTS: Fluorescence microscopy showed differences between the cells transfected and not transfected with pREGFP plasmid. Mild fluorescence was observed in the cardiac fibers that received saline solution; however, the myocardial cells transfected with pREGFP had overt EGFP expression. CONCLUSION: Transfection with the EGFP gene in healthy canine myocardium was effective. The reproduction of this efficacy using vascular endothelial growth factor (VEGF) instead of EGFP aims at developing gene therapy for ischemic heart disease

Establishment of an adherent cell layer from human umbilical cord blood

As células-mäe säo encontradas no sangue do cordäo umbilical humano (HUCB), além de na medula óssea e no sangue periférico, e há um crescente interesse no uso desse material como uma fonte alternativa para transplante de medula óssea e terapia gênica. A hematopoiese in vitro tem sido mantida por até 16 semanas em culturas de HUCB, mas o estabelecimento de uma camada estromal aderente tem invariavelmente falhado. Precursores de células aderentes foram pesquisados entre células mononucleares do HUCB em culturas a longo prazo. Células mononucleares obtidas do sangue do cordäo depois de partos normais a termo foram cultivadas em diferentes concentraçöes em meio Dulbecco modificado por Iscove, com alimentaçäo semanal. Uma camada aderente foi detectada em 16 de 30 culturas, 12 das quais em concentraçöes celulares maiores que 2 x 10(potência 6) células/ml. Ao contrário das culturas de medula óssea, em que o estroma é detectado precocemente, na maioria (10/16) das culturas positivas do HUCB a camada aderente foi identificada apenas depois da quarta semana de cultura. As células nunca atingiram a confluência e se destacaram da placa aproximadamente quatro semanas após sua detecçäo. A coloraçäo de culturas positivas por May-Grünwald-Giemsa revelou células aderentes semelhantes a fibroblastos ou semelhantes a células endoteliais em um arranjo diferente daquele do estroma da medula óssea em 13 amostras. Em duas dessas, as células aderentes estavam organizadas em cordöes característicos e delimitados de células. Ao contrário das culturas de medula óssea, células gordurosas nunca foram observadas nas camadas aderentes. Um rápido desenvolvimento de grandes células mielóides na primeira semana de cultura foi característico de culturas negativas e essas células mantiveram-se por até 12 semanas. HUCB contém precursores de células aderentes que ocorrem em números menores do que na medula óssea e podem estar em um estágio diferente (possivelmente menos maduro) de diferenciaçäo.

Analysis of mRNA transcripts in chronic myeloid leukemia patients

Neste trabalho foi analisado por RT-PCR o tipo de junçäo no mRNA BCR/ABL híbrido, que caracteriza a leucemia mielóide crônica (CML), em material proveniente de 33 pacientes (22 homens e 11 mulheres). Em 14 dos casos (42,4 por cento) foi observado mRNA do tipo b3a2, em 13 (39,4 por cento) mRNA b2a2 e em 6 (18,2 por cento) ambos os tipos, mas com predomínio de b3a2. Näo foram observadas correlaçöes estatisticamente significantes entre tipo de mRNA e idade, teor de hemoglobina, contagem de leucócitos e plaquetas, porcentagem de blastos ou basófilos e esplenomegalia, todos ao diagnóstico, assim como sexo do paciente ou duraçäo da fase crônica. Foram realizadas ainda análises combinando os dados obtidos neste estudo com outros publicados para os seguintes parâmetros: idade ao diagnóstico, índice Sokal, sexo e linhagem celular da crise blástica. Apenas no estudo combinado sexo X tipo de mRNA foi verificada associaçäo estatisticamente significante (P=0,029), com predominância de homens nos grupos que expressam b2a2 (2,68:1) e b3a2 (1,33:1). Conclui-se que a categorizaçäo dos pacientes quanto ao tipo de mRNA näo homogeneiza os dados clínicos e hematológicos dentro de cada grupo, onde a variância é grande, nem os diferencia.

Analysis of Brazilian rabies virus isolates with monoclonal antibodies to lyssavirus antigens

Brazilian rabies virus isolates from different host species obtained from different geographical areas in the country were analysed in their reactivity profile with a panel of monoclonal antibodies (Mabs) prepared against members of the Lyssavirus genus of the family Rhabdoviridae. The panel included fourteen Mabs prepared against rabies-related viruses and two Mabs prepared to the CVS-31 rabies vaccine strain. Isolates were multiplied in mice and brain impressions examined by indirect immunoflurescence. Epitopes common to lyssaviruses were identified in all rabies viruses examined. differential patterns of reactivity were obtained with ten of the sixteen Mabs. Two Mabs reacted only with viruses from cattle and horses with the same reactivity profile, suggesting a common origin for the viruses, most likely vampire bats.

Depressao maior e atividade do sistema imunológico / Major depression and immune system activity

O conceito de que o estresse psíquico pode predispor à doença física é de séculos atr s, mas apenas recentemente atraiu a atençäo da comunidade científica. V rios trabalhos no campo da psiconeuroimunologia apontam a existência de uma comunidade bidirecional entre os sistemas imunológico e neuroendócrino. É com base nesse eixo de intercomunicaçöes que podemos pensar que uma alteraçäo psíquica ocasione modificaçöes do comportamento imune. Os indivíduos deprimidos apresentam alteraçöes neuroquímicas e endócrinas que podem estar relacionadas à baixa imunidade celular e à relativa estimulaçäo da atividade humoral

Production of monoclonal antibodies specific to human von Willebrand Factor

Um anticorpo monoclonal específico para o fator von Willebrand (FvW) humano, o vW1E2, foi produzido imunizando-se camundongos da lihangem BALB/c com FVIII/FvW parcialmente purificado. A análise do anti-soro e a triagem dos hibridomas foram feitas por ELISA empregando anti-soro de coelho anti-FvW como anticorpo de captura do FvW plasmático. A especificidade do vW1E2 ao FvW foi demonstrada testando-o contra plasmas de indivíduos normais, hemofílicos A e pacientes com DvW. Esta especificidade foi confirmada através de experimentos de imunoprecipitaçäo nos quais o FvWAg era precipitado do plasma pelo vW1E2 com auxílio de anti-soro de coelho anti-Ig de camundongo, como demonstrado por imunoelectroforese (EIA) e ELISA. Foi entäo desenvolvido um ELISA, empregando o vW1E2, o qual foi avaliado como técnica de quantificaçäo do FvWAg plasmático. Foram testados amostras de plasmas de pacientes com DvW tipo I e tipo II, assim como de indivíduos normais e hemofílicos A. Os níveis de FvWAg obtidos por ELISA foram comparados aos obtidos por IEA observando-se uma correlaçäo significativa entre eles (r=0,735; GL=35; P<0,001)

Role of suppressor cells in non-MHC-linked genetic control of the antibody response to F antigen

O presente trabalho descreve a investigaçäo do mecanismo através do qual é exercido o controle genético näo ligado ao complexo de histocompatibilidade principal (MHC) sobre a magnitude da resposta imunológica contra o antígeno F em camundongos. Animais da linhagem B10.A, que normalmente apresentam pequena produçäo de anticorpos ant-F, mostraram um aumento no nível da resposta contra este antígeno quando duas modificaçöes nas condiçöes de imunizaçäo foram introduzidas: (a) o uso de alum + Bordetella pertussis em lugar de Freund's adjuvante; (b) injeçäo do antígeno nas patas trazeiras ao invés de intraperitonealmente. Experimentos envolvendo a transferência de linfócitos entre animais produzindo alta ou baixa quantidade de anticorpos ant-F mostraram presença de células T supressoras na linhagem B10.A e em híbridos entre CBA e DBA/2, cuja resposta contra o antígeno F é baixa. Estes resultados indicam que os genes näo ligados ao MHC, responsáveis pelo controle da magnitude da resposta ant-F, atuam através da regulaçäo da diferenciaçäo ou expressäo de células T supressoras